豬圓環(huán)病毒2型抗體試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬圓環(huán)病毒2型抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To
Porcine Circovirus Type 2 Antibody Test Kit
（PCV Ab）,ELISA
【規(guī)格】
96T×2/盒
【預期用途】
本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬圓環(huán)病毒抗體。可用于評估感染豬的血清學診斷以及豬圓環(huán)病毒的流行病學調(diào)查、豬群豬圓環(huán)病毒疫苗免疫狀況分析。但試劑盒所測結(jié)果不能用于作為區(qū)分免疫抗體和感染抗體的指標，若想確認是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床資料、免疫狀況及其他診斷方法綜合進行分析。
【檢驗原理】
本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬圓環(huán)病毒抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的PCV-Ab結(jié)合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PCV-Ab+酶標抗豬IgG抗體”復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與PCV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后，經(jīng)酶標儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
【主要組成成份】
1 | PCV抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | PCV-IgG陰性對照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
5 | PCV-IgG陽性對照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 |
|
10 | 說明書 | 1份 |
|
【自備器材】
1．酶標儀，雙波長450/630nm濾光片
2．精確的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．洗液吸移裝置
6．一次性槍頭（10ul，200ul）
7．去離子水
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。
【實驗準備】
1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，可以獲得ZUI佳結(jié)果。
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（加入樣本后溶液顏色會有變化），稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍，即可使用。
【檢驗方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測時，設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。
2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應板孔，無需靜置，直接甩出，洗滌3次，ZUI后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體。
4．加酶：每孔加酶標記物100μl。
5．溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同步驟3。
7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。
9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD450/630值；
當樣本的S/P≥0. 2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性；
樣本中抗體相對水平——效價（ET），其與S/P的關(guān)系如下：
lg（ET的倒數(shù)）= 1.0267x + 0.6884
x=S/P值。
此效價是根據(jù)實驗室目前對PCV檢測方法和免疫的抗體反應兩方面綜合而定；在免疫時效檢測和記錄有代表性樣本的抗體效價是對豬群的免疫狀況的ZUI好評價，得出的豬群狀況可對免疫全程中抗體滴度的分布和變化進行分析。
若進行大量樣本檢測時，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進行分析數(shù)據(jù)結(jié)果，該軟件可登陸本公司*網(wǎng)站下載。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導致假陽性；有血脂樣沉淀或長菌的樣本可能導致假陰性。
2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現(xiàn)個別豬只免疫疫苗后檢測結(jié)果為陰性。
3．陽性結(jié)果用于感染豬的血清學診斷以及流行病學調(diào)查時需結(jié)合其他診斷方法和臨床資料進行分析。
【產(chǎn)品性能指標】
1．特異性：以本品檢測參比血清，符合率達100%。
2．靈敏度：本試劑盒檢測方法的靈敏度ZUI高可達1：5120。
3．重復性：不同批次間CV（%）不高于8%。
4．穩(wěn)定性：試劑盒在2℃～8℃放置6個月或37℃放置3天，測定結(jié)果達到以上1-3標準。
【注意事項】
1．本試劑盒僅供研究使用。
2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用。
3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書。
4．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
5．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
6．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。
7．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性。
8．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。
