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超純RNA提取試劑盒實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):2725 更新時(shí)間:2021-08-16

超純RNA提取試劑盒說(shuō)明書

Ultrapure RNA Kit

目錄號(hào):K0581

保存條件:Buffer RLT 2-8℃避光保存。其他組分室溫(15-25℃)保存。

組分說(shuō)明

                  Cat. No.                        K0581

                  Kit Size                         50

                  Buffer RLT                      60 ml

                  Buffer RW1                      40 ml

                  Buffer RW2concentrate)         11 ml

                  RNase-Free Water                10 ml

                  Spin Column RM                   50

                  Collection Tube1.5  ml)         50

                  Collection Tube2  ml)           50

             本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

  本試劑盒是基于TRIzon改進(jìn)后的柱式總RNA提取試劑盒,裂解液充分裂解并勻質(zhì)

化樣本,采用*的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù),通過(guò)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下高效專一的結(jié)

合溶液中的RNA,同時(shí)最大限度的有效除去蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽離子及有機(jī)雜質(zhì)等;可從

動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中快速提取總RNA,每次可處理

30-50 mg組織或5×10細(xì)胞,可同時(shí)處理多個(gè)不同樣品。本試劑盒提取得到的RNA可直

接應(yīng)用于RT-PCRNorthern6  BlotDot Blot、體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

·純度高:最大限度除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì),提取的RNA可直接用于下游各種實(shí)驗(yàn)。

·提取量大:*的裂解液配方,充分裂解細(xì)胞或組織,RNA提取量多至100μg

·快速:步驟少,操作簡(jiǎn)單,節(jié)省時(shí)間。

·兼容性強(qiáng):適用于多種動(dòng)植物組織和細(xì)胞RNA的提取。

自備試劑:氯仿(新開封或提取RNA專用)70%乙醇(無(wú)RNase水配制)、無(wú)水乙醇。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

1.預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:

  1)使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

  2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí),塑料器皿可在0.5M  NaOH中浸

  10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

  3)配制溶液應(yīng)使用無(wú)RNase的水。

  4)操作人員戴一次性口兆罩和手套,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要勤換手套。

2.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。

3.使用前若發(fā)現(xiàn)Buffer RLT有沉淀,可置于56℃水浴幾分鐘,即可溶解。

4.第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽說(shuō)明在Buffer RW2中加入無(wú)水乙醇。

5.所有離心步驟若無(wú)特殊說(shuō)明均在室溫下進(jìn)行,且所有操作步驟動(dòng)作要迅速。

6.若下游實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA非常敏感,建議用不含RNaseDNase  I(貨號(hào):K2090A)對(duì)

  RNA進(jìn)行處理。

操作步驟

1.樣品處理

  1a.植物組織:取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在Buffer

  RLT中迅速研磨,每30-50 mg組織加入1 ml Buffer RLT,混勻。

  注意:樣品體積一般不要超過(guò)Buffer RLT體積的10%

  1b.動(dòng)物組織:取新鮮或-70℃凍存的動(dòng)物組織盡量剪碎,每30-50 mg組織加入1 ml

  Buffer RLT,勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入Buffer RLT 1 ml混勻。

  注意:樣品體積一般不要超過(guò)Buffer RLT體積的10%

  1c.單層培養(yǎng)細(xì)胞:吸去培養(yǎng)液,可直接在培養(yǎng)板中加入適量Buffer RLT(每10 cm                                2

  面積需要1 ml Buffer RLT),用取樣器反復(fù)吹打使細(xì)胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后,

  將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至RNase-Free的離心管中,300×g離心5 min,收集細(xì)胞沉淀,仔細(xì)

  吸除所有上清,加入Buffer RLT 1 ml混勻。

  注意:1)收集細(xì)胞數(shù)量不要超過(guò)1×107

  2Buffer RLT加量根據(jù)培養(yǎng)板面積決定,不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果Buffer  RLT加量不足,可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。

  3)收集細(xì)胞時(shí)一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈,否則會(huì)導(dǎo)致裂解不*,造成RNA的產(chǎn)量降低。

  1d.細(xì)胞懸液:離心收集細(xì)胞。每5×106   -1×107動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌

  注意:細(xì)胞加入1)加入1 mlBuffer Buffer RLT RLT前不要洗。 滌細(xì)胞,以免RNA降解。

  2)一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞可能需要?jiǎng)驖{儀或液氮研磨處理。

  1e.血液處理:直接取新鮮的血液,加入3倍體積的Buffer RLT(推薦0.25 ml全血加入

  0.75 ml Buffer RLT),充分振蕩混勻。

  1f.可選步驟:對(duì)于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質(zhì)含量高的樣品,如肌肉組織、脂肪組

  織或植物的塊莖,可以在勻漿處理后4℃,12,000 rpm~13,400×g)離心10分鐘以除去不溶物質(zhì),此時(shí)沉淀中含胞外物質(zhì)、多糖和高分子量的DNA,而RNA存在于上清中。

2.樣品中加入Buffer  RLT后反復(fù)吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘,使蛋白

  核酸復(fù)合物*分離。

3.以每1 ml Buffer RLT加入200 μl氯仿的比例加入氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩15秒,

  室溫放置2分鐘。

   44℃  12,000  rpm~13,400×g)離心10分鐘,此時(shí)樣品分為三層:紅色有機(jī)相,中間層和上層無(wú)色水相, RNA主要在上層水相中,將上層水相移到一個(gè)新的 RNase-

Free離心管(自備)中。

   5.在得到的水相溶液中加入等體積的70%乙醇(無(wú)RNase水配制),顛倒混勻。

   6.將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管(Collection Tube 2 ml)的吸附柱(Spin

       Column RM)中。若一次不能加完溶液,可分多次轉(zhuǎn)入。12,000 rpm離心20秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

   7.向吸附柱中加入700 μl Buffer RW112,000 rpm離心20秒,倒掉收集管中的廢液,

       將吸附柱重新放回收集管中。

   8.向吸附柱中加入500  μl Buffer  RW2(使用前檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000

       rpm離心20秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

   9.重復(fù)步驟8

   1012,000 rpm離心2 分鐘,倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,*晾干。

        注意:這一步目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇?xì)埩魰?huì)影響后續(xù)酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。

   11.將吸附柱置于一個(gè)新的無(wú)RNase離心管(Collection Tube 1.5 ml)中,向吸附柱的

        中間部位加入30-50 μl RNase-Free Water,室溫放置1分鐘,12,000 rpm離心1分鐘,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

        注意:1RNase-Free Wate體積不應(yīng)小于30 μl,體積過(guò)小影響回收率。

        2)如果要提高RNA的產(chǎn)量,可用30-50 μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟11

        3)如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟11

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

 

透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

 

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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