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豬場豬瘟疫苗免疫狀況的評價以及感染豬的血清學診斷
點擊次數(shù):1048 更新時間:2022-02-18

               

豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:豬瘟病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名稱:Diagnostic Kit For Classical Swine Fever Virus AntibodyCSFV Ab,ELISA

【規(guī)格】

96T×2/

【用途】

用于檢測豬血中豬瘟病毒抗體,適用于豬瘟疫苗免疫狀況價以及感染豬的血清學診斷

【檢驗原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)原理,由包被有高純度的豬瘟病毒重組抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機理為包被抗原與樣本中的CSFV-Ab結(jié)合,再與酶標抗豬IgG抗體形成包被抗原+CSFV-Ab+酶標抗豬IgG抗體"復合物,加入顯色劑,通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與CSFV-Ab的量成正比,當樣本反應(yīng)顯色后,經(jīng)酶標儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性,即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在

【主要組成成份】

1

CSFV抗原包被板

96T×2

2

酶標記物

22ml

色帽

3

樣本稀釋液

50ml

透明

4

CSFV-IgG陰性對照血清

1.5ml

綠色帽

5

CSFV-IgG性對照血清

1.5ml

紅色帽

6

顯色劑

12ml×2

色帽

7

終止液

12ml

色帽

8

20X濃縮洗滌液

50ml

白色帽

9

蓋板膜

2


10

說明書

1


【自備器材】

1酶標儀,雙波長450/630nm濾光片

2精確的微量移液器(單道1-100ul0.5-10ul、多道30-300ul

3.水浴箱或恒溫箱

4.微量振蕩器

5.洗液吸移裝置

6.一次性頭(10ul200ul

7.去離子水

【樣本要求】

1本試劑檢測的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無菌采集,28貯存應(yīng)不超過一周,長期應(yīng)在-20以下保存。

2避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

3.樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。

【實驗準備】

1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前,先取出置室溫30min,可以獲得最佳結(jié)果。.

2樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋(即:5μl血清加195μl樣品稀釋液),混合均勻。

3配制洗滌液將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20(即1ml濃縮洗滌液加19ml水),即可使用。注意:使用前要使結(jié)晶*溶解。

【檢驗方法】

1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測時,設(shè)陰、陽性對照各2孔,分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗)

2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37溫育30分鐘。

3洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,靜置10,直接甩出,洗滌3次,最后一次洗滌后干板內(nèi)液體。

4加酶:每孔加酶標記物100μl

5溫育:加好酶標記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜,置37溫育30分鐘。

6洗板:同步驟3

7顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37避光反應(yīng)10分鐘。

8終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。

9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。

【結(jié)果判定】

在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD1.0,陰性對照孔的平均OD值必須<0.1;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定,S/P值計算時按以下方式處理:

 S/P=(樣本OD450/630-NCx())/(PCx()-NCx()),其中NCx()表示陰性對照孔平均OD450/630值(0.05以下的數(shù)值按0.05計算),PCx()表示陽性對照孔平均OD450/630值;

當樣本的S/P≥0. 25時判為陽性;樣品S/P值<0.25時判為陰性

若進行大量樣本檢測時,可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進行分析數(shù)據(jù)結(jié)果,該軟件可登陸本公司網(wǎng)站下載。

【注意事項】

1.本試劑盒僅供研究使用

2.不要使用過期的試劑盒組分,不要把不同批次的組分混合使用。

3.使用試劑盒之前,一定要仔細閱讀說明書。

4 使用前,濃縮的洗應(yīng)至室20~25),并搖動使沉淀溶解(最好在37水浴中加5~10分),然后用去離子水作20倍稀(例如:50ml的濃縮液加上950ml蒸水),混,稀好的洗液在2~8可以存放7-10日。

5.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待,試驗廢棄物應(yīng)經(jīng)121高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

6.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2-8避光保存。

7.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對其準確性。

8.加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

9.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

【儲存條件及有效期】

28避光保存,防止冷凍,有效期12個月。

【生產(chǎn)日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

實驗代做服務(wù):




滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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