EF12A-K8
萊克多巴胺
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物萊克多巴胺將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗萊克多巴胺抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物萊克多巴胺的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物萊克多巴胺的含量。
二、試劑盒特性
u 試劑盒靈敏度： 0.04ppb
u 孵育溫度： 25℃
u 孵育時間： 30min～15min
u 樣本檢測下限
血 清 ······························ 0.5ppb
u 交叉反應率
萊克多巴胺（Ractopamine） ····················· 100%
多巴酚丁胺 （dobutamine）···················· < 1%
沙丁胺醇（Salbutamol ） ························ <0.1%
克倫特羅（Clenbuterol）························ <0.1%
u 樣本回收率
血 清 ····························· 95%±20%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.04ppb |
0.12ppb | 0.36ppb | ||
1.08ppb | 3.24ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 10ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標儀、離心機、恒溫箱、打印機
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道30～300 µl
五、樣本前處理步驟
u 樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
u 樣本前處理需配制：
配液1 洗滌液
20X濃縮洗滌液用去離子水1：19稀釋
u 樣本處理：
（a）血清處理方法
1、 將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血漿或過濾血漿；
2、 取20µl血清用于分析。
樣本稀釋倍數: 1倍
六、 酶標免疫分析程序:
u 測定前應須知：
1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
2、 使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
u 操作步驟：
1、 從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標準品/樣本20µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50µl/孔，再加入80µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應30min。
5、 將孔內液體甩干，用洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15-～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、 顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
7、 測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內讀數），測定每孔OD值。
七、結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.04ppb為1.816；0.12ppb為1.415；0.36ppb為0.74；1.08ppb為0.313；3.24ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.08ppb～3.24ppb；樣本2的濃度范圍是0.12ppb～0.36ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中萊克多巴胺實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以萊克多巴胺標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中萊克多巴胺實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索取）
八、 注意事項
1、 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時，表示試劑可能變質。
8、 該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲藏條件和保質期
1、 儲藏條件：試劑盒于2～8℃保存，不要冷凍。
2、 保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒。
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。
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