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鴨瘟病毒(DEV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
點(diǎn)擊次數(shù):59 更新時(shí)間:2025-12-03

鴨瘟病毒(DEV核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR)

 

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:鴨瘟病毒(DEV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)  

 

【包裝規(guī)格】50T/盒

                                                                    

【預(yù)期用途】

鴨瘟(Duck plague)又名鴨病毒性腸炎,是鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病該病的特征是流行廣泛,傳播迅速,發(fā)病率和死亡率都高。本試劑盒適用于檢測(cè)內(nèi)臟、拭子糞便等樣本中的鴨瘟病毒,用于鴨瘟病毒感染的輔助診斷。

 

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),設(shè)計(jì)1對(duì)鴨瘟病毒特異性引物,結(jié)合1條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)鴨瘟病毒的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

 

【試劑組成】

     

  規(guī)      

DEV酶液

       25μL×1管

DEV反應(yīng)液

   975μL×1管

DEV陽(yáng)性質(zhì)控品

      50μL×1管

陰性質(zhì)控品

     50μL×1管

說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

 

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融不超過(guò)5次,有效期12個(gè)月。

 

適用儀器

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

 

【標(biāo)本采集】

    病死或撲殺的,無(wú)菌剪取內(nèi)臟樣品1g;生取咽拭子或糞便樣品,采樣時(shí)要將拭子深入喉頭及上顎,來(lái)回刮3~5次取分泌液

 

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò)6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

 

使用方法

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中

 

1.2 DNA提取

為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、有效、可靠,建議使用商品化的DNA 提取試劑盒進(jìn)行提取,嚴(yán)格按照對(duì)應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

 

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿7份,多配制1份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

DEV反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為N)

19.5μL

0.5μL

 

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1提取的DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取5μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

 

4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;

熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM檢測(cè)鴨瘟病毒,淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1 cycle

95℃

3min

2

40 cycles

95

15sec

55℃

30sec

 

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline和Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

 

5.2 結(jié)果判斷

陽(yáng)性:檢測(cè)通道Ct值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。

可疑:檢測(cè)通道35.0<Ct值<38.0,且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)Ct值≤38.0和典型擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú)Ct值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。

 

6. 檢測(cè)方法的局限性

樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;

陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;

病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

 

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú)Ct值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且Ct值≤30

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

 

8. 性能指標(biāo)

1)敏感性:內(nèi)控樣本敏感性為100%,綜合評(píng)價(jià)敏感性98%以上。最低檢測(cè)限不低于1000copies/ml。

2)特異性:100%。

3)穩(wěn)定性:批內(nèi)及批間差異≤3%。

 

注意事項(xiàng)

所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;

試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完全混勻并短暫離心;

反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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