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PPA制備與使用的基本技術
點擊次數(shù)：3303 更新時間：2014-12-29
PPA制備與使用的基本技術
- 將初步純化的SPA與HRP用過碘酸鈉氧化法（交聯(lián)反應時間在22℃下5h）交聯(lián)。
- 將上述PPA溶液過Sephadex G-100柱，條件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存在的主要組分，可用ELISA塑料平板法檢測活性。將合并液濃縮，然后加入30%左右甘油，貯于4℃冰箱備用
PPA的使用
- PPA-ELISA法。基本上與ELISA法相同，PPA代替了酶標抗抗體。在進行微量反應板測定時，PPA常常加入0.1ml,稀釋度一般在1：2至1：100（應按不同情況試驗）。PPA與IgG是化學共價結(jié)合，反應時間不宜過長，不應超過2h，控制在30min-60min,反應時間過長會使PPA吸附到塑料載體上去。
- 用PPA進行組織內(nèi)有關抗原的定位。甲醛對PPA有顯色影響，因此組織不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA對組織內(nèi)抗原（先與IgG結(jié)合）的定位，反應時間可以延長，便于滲透入組織細胞內(nèi)，且沒發(fā)現(xiàn)嚴重的物理吸附現(xiàn)象。
- 在PPA實驗中稀釋液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液（2.42gTris溶于蒸餾水后用0.1N HC1調(diào)pH至7.4，然后加蒸餾水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20）。
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