呋喃唑酮代謝物快速檢測試劑盒說明書 |
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呋喃唑酮代謝物 快速檢測試劑盒說明書 一、原理 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物呋喃唑酮代謝物將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗呋喃唑酮代謝物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含殘留物呋喃唑酮代謝物的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物呋喃唑酮代謝物的含量。 二、試劑盒特性
肌肉組織 ································· 0.05ppb 雞蛋 ······································· 0.05ppb 蜂蜜 ········································· 0.05ppb
呋喃唑酮代謝物 ································· 100% 呋喃它酮代謝物 ······························· ＜0.1% 呋喃妥因代謝物 ······························· ＜0.1% 呋喃西林代謝物 ······························· ＜0.1%
肌肉組織 ································· 95%±25% 雞蛋 ······································ 95%±25% 蜂蜜 ······································· 85%±23% 三、試劑盒組成
四、所用儀器、試劑 具備的儀器：酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱、恒溫水浴鍋 微量移液器：單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl 試 劑：氫氧化鈉、K2HPO4·3H2O、正己烷、乙酸乙酯、濃HCl 五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。 （b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
配液1 0.1M K2HPO4溶液： 稱11.4g K2HPO4·3H2O加去離子水溶解定溶至500ml。 配液2 1M HCl 溶液： 取8.6ml濃HCl加去離子水定容至100ml。 配液3 1M NaOH溶液： 稱4g NaOH加去離子水定容至100ml 配液4 樣本復溶液： 將2X濃縮復溶液用去離子水按1：1稀釋。
（a）肌肉、雞蛋樣本處理方法 稱取1±0.05g的均質物，分別加入4ml的蒸餾水，0.5ml 1M HCl溶液和100µl衍生化試劑，充分振蕩2min； 在37℃過夜孵育（大約16h）或56℃水浴中孵育(2h)； 分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和6ml乙酸乙酯，充分振蕩30s； 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min（如出現乳化現象或乙酸乙酯層不足 3ml ，在 80 ℃ 水浴孵育樣品10min 并重復離心；或提高轉速和延長離心時間重復離心）； 取出3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50℃氮氣/空氣吹干。 用2ml正己烷溶解干燥物，再加入1ml樣本復溶液充分混合30s；在室溫下4000r/min以上離心10min；去除上層正己烷相（如出現乳化現象，則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min，重復離心）； 取50µl下層用于分析。 樣本稀釋倍數: 2倍 （b）蜂蜜樣本處理方法 稱取2±0.05g的均質物（蜂蜜），分別加入4ml的蒸餾水，0.5ml 1M HCl溶液和100µl衍生化試劑，充分振蕩2min； 在37℃過夜孵育（大約16h）或56℃水浴中孵育(2h)； 分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和6ml乙酸乙酯，充分振蕩30s； 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min（如出現乳化現象或乙酸乙酯層不足 3ml ，在 80 ℃ 水浴孵育樣品10min 并重復離心；或提高轉速和延長離心時間重復離心）； 取出3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50℃氮氣/空氣吹干； 用2ml正己烷溶解干燥物，再加入1ml樣本復溶液充分混合30s；在室溫下4000r/min以上離心10min；去除上層正己烷相（如出現乳化現象，則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min，重復離心）； 取50µl下層用于分析。 樣本稀釋倍數: 1倍 六、 酶標免疫分析程序:
七、結果判定 結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含呋喃唑酮代謝物量成負相關。 1、粗略判定： 用樣本的平均吸光度值與標準液吸光度值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.01ppb為1.816；0.03ppb為1.415；0.09ppb為0.74；0.27ppb為0.313；0.81ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.27ppb～0.81ppb；樣本2的濃度范圍是0.03ppb～0.09ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中呋喃唑酮代謝物實際濃度。 2、定量分析 （1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以di一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值 （2）標準曲線的繪制與計算 以標準品百分吸光率為縱坐標，以呋喃唑酮代謝物標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中呋喃唑酮代謝物實際濃度。 若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來索取） 八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。
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