炭疽桿菌（BA）核酸檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR 法） |
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炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR 法) 【產(chǎn)品名稱(chēng)】 將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反 應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。 通用名稱(chēng)：炭疽桿菌(BA)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR 法) Name ：Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method) 4 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)） 4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)； 4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL； 熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。 【包裝規(guī)格】48T/盒 【預(yù)期用途】 炭疽是由炭疽桿菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一種人獸共患病。BA 在環(huán)境中形成芽孢，可長(zhǎng)期、穩(wěn)定地存在于自然界中。由于 BA 的穩(wěn)定性及其致 病性，易引發(fā)突發(fā)公共衛(wèi)生事件。目前的 BA 檢測(cè)方法主要基于病原體的培養(yǎng)、染色 鏡檢、血清學(xué)檢測(cè)等，但這些方法均不適合早期的快速偵檢。基于核酸檢測(cè)的熒光-PCR 技術(shù)，因其靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、特異性好，可快速檢測(cè)炭疽病原，及時(shí)控制炭疽疫 4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置： 步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 95℃ 94℃ 55℃ 時(shí)間 收集熒光信號(hào) 1 1 cycle 10min 15sec 30sec 否 否 是 情 [1] 。 2 40 cycles 本試劑盒適用于檢測(cè)皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌，用于 炭疽桿菌感染的輔助診斷。 5 結(jié)果分析判定 6.1結(jié)果分析條件設(shè)定 【檢驗(yàn)原理】 [2-3] ，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)炭疽 設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線(xiàn)出現(xiàn) 整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào) 節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng) 閾值線(xiàn)至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。 本試劑對(duì)炭疽桿菌特異性基因設(shè)計(jì)引物和熒光探針 桿菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。 【試劑組成】 名 稱(chēng) 格 7結(jié)果判斷 核酸提取液 酶液 1.5mL×2 管 50μL×1 管 1.0mL×1 管 50μL×1 管 250μL×1 管 陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，丏曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線(xiàn)。 可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>35.0，丏出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線(xiàn)的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試 驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴(kuò)增曲線(xiàn)者為陽(yáng)性，否則為陰性。 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值丏無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線(xiàn)。 BA 反應(yīng)液 BA 陽(yáng)性質(zhì)控品 陰性質(zhì)控品 8 檢測(cè)方法的局限性 注： 1）不同批號(hào)試劑不能混用。 Ø 樣本檢測(cè)結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)； Ø 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果； Ø 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果； Ø 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果； Ø 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果； Ø 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定 量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果； 2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。 【儲(chǔ)存條件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融數(shù)不超過(guò) 5 次，有效期 12 個(gè)月。 【適用儀器】 ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列 熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。 Ø 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。 9. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 【標(biāo)本采集】 陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線(xiàn)或無(wú) Ct 值顯示； 陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線(xiàn)有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，丏 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。 皮膚炭疽，取水泡液 1mL；肺炭疽，采集咽拭子標(biāo)本，放入標(biāo)本采集管中；腸炭 疽，取糞便 1g 【保存和運(yùn)輸】 上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)本 運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。 【注意事項(xiàng)】 Ø 所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行； Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，*混勻并短暫離心； Ø 反應(yīng)液應(yīng)避光保存； 【使用方法】 1. 樣品處理（樣本處理區(qū)） Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊； Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服； Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染； Ø 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器； Ø 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通 則》進(jìn)行處理。
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