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丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量試劑盒說明書

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丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量試劑盒說明書

可見分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質;后者逐漸分解為一系列復雜的化合物,其中包括 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。

測定原理:

MDA 與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在 532nm有大吸收峰,進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量;同時測定 600nm 下的吸光度,利用 532nm與 600nm 下的吸光度的差值計算 MDA 的含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配置:

提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;

注意事項:

臨用前注意試劑一是否*溶解,如未溶解,可以 70℃加熱,并振蕩以促進溶解。

MDA 提取:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

加入 1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、吸取 0.6mL試劑一于1.5mL 離心管中,再加入0.2mL 樣本, 混勻。

2、95℃水浴中保溫 30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,25℃,離心

10min。

3、吸取上清液于1mL玻璃比色皿中,測定532nm和600nm處的吸光度,記為A532 和A600,

ΔA= A532-A600。蒸餾水調(diào)零

 

 

MDA 含量計算:

1、血清(漿)中 MDA 含量的計算:

MDA 含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=25.8×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算

(1)按照蛋白濃度計算

MDA 含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣)=25.8×ΔA ÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

(2)按照樣品質量計算

MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)

=25.8×ΔA ÷W

(3) 按照細菌或細胞密度計算:

MDA 含量(nmol/104 )=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)

=0.0516×ΔA

V 反總:反應體系總體積,8×10-4 L;ε:丙二醛摩爾消光系數(shù),155×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.2 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。

 

 

實驗代做服務:

 

免疫組化IHC染色實驗服務

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術服務

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術服務

 

染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

免疫細胞化學ICC實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務

PKC活性檢測實驗

非標定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

細胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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