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人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒
人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒
更新時間:2025-12-17
訪問量: 960
廠商性質: 生產廠家

人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒--價格合適,質量可靠。咨詢!

人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒產品概述:

角化細胞生長因子(KGF)酶聯免疫分析

試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定人血清,細胞上清及相關液體樣本中角化細胞生長因子(KGF)的含量。

實驗原理:

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中角化細胞生長因子(KGF)水平。用純化的角化細胞生長因子(KGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入角化細胞生長因子(KGF),再與HRP標記的角化細胞生長因子(KGF)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的角化細胞生長因子(KGF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中角化細胞生長因子(KGF)濃度。

 

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品:1350ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟:

  1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為900 ng/L 60 0ng/L30 0ng/L150 ng/L75 ng/L)。
  2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液50μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為6倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  7. 溫育:操作同3
  8. 洗滌:操作同5
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

注意事項:

  1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
  3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
  4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×6)。
  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6. 底物請避光保存。
  7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
  9. 本試劑不同批號組分不得混用。

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      

倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

倍數,即為樣品的實際濃度。

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。

2.批內與批間應分別小于9%15%

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA 試劑盒
大鼠17羥皮質類固醇(17-OHCS)ELISA 試劑盒
大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA 試劑盒
大鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA 試劑盒
大鼠白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA 試劑盒
大鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA 試劑盒
大鼠白介素3(IL-3)ELISA 試劑盒
大鼠白介素5(IL-5)ELISA 試劑盒
大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA 試劑盒
大鼠瘦素(LEP)ELISA 試劑盒
大鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA 試劑盒
大鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA 試劑盒
大鼠單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA 試劑盒
大鼠單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA 試劑盒
大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA 試劑盒
大鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA 試劑盒
大鼠巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA 試劑盒

 

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