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PKC活性檢測實驗
PKC活性檢測實驗
更新時間:2025-02-05
訪問量: 3853
廠商性質: 生產廠家

提供商:上海研謹生物/杭州研謹生物
服務名稱:PKC活性檢測實驗
規格: 實驗服務
價格:200元
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!

PKC活性檢測實驗產品概述:

PKC活性檢測實驗試劑: 瓊脂糖(Promega公司,V3125) ;其他常備試劑購自sigma公司; PKC活性檢測試劑盒(Promega公司,V5330)

實驗儀器:電泳儀(北京六一廠,112-0640) ;水平電泳槽(北京六一廠,122-3146) ;電熱恒溫培養箱(碧云天生物,EBI025) ;電熱恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市環宇科學儀器廠,HH-8)

基本原理:分離PKC蛋白(磷酸化蛋白及非磷酸化蛋白),利用試劑盒組分將2種蛋白分離并加以區分,利用電泳瓊脂糖凝膠技術顯示2種不同的蛋白,利用分析軟件將顯示的不同蛋白定量并加以比較,以磷酸化PKC非磷酸化PKC灰度值IOD的比值顯示PKC活性(PKC活化度)。


PKC活性檢測實驗操作步驟:

1.用預冷的勻漿器把細胞勻漿。

2.在4°C,用14,000 xg離心裂解液5分鐘,保存上清。

3.用PKC抽提液預平衡1ml的DEAE纖維素柱,再把第2步中得到的上清過柱。用5m的PKC抽提液洗柱子,然后用5ml含有200mM NaCI的PKC抽提液洗脫含有PKC的組分。

4.用PKC稀釋液(PKC dilution buffer)將少量蛋白激酶C (Promtein Kinase C)稀釋到2 .5ug/ml.隨試劑盒所附的產品信息中標有這個酶的初始濃度。

5.用探頭超聲波破碎儀超聲處理PKC Activator Solution 20-30秒,或直到溶液變溫暖。

6.對每一個樣品,按照下面所列順序在0.5ml小離心管中混合PepTag@ PKC 5x Buffer,PepTag@ C1Peptide,超聲過的PKC Activator 5X Solution,和水。在樣品加入之前,小離心管--直要放在冰上。陰性對照將用于對反應進行定量時確定其摩爾吸收值(說明書第IV部分) 。


標準PKC檢測

PepTag@ PKC Reaction 5X Buffer           5ul

PepTag@ C1 Peptide (0.4ug/ul)            5ul

PKC Activator 5X Solution,超聲處理的      5ul

短肽保護液(非必須)                    1ul

樣品                                 9ul

去離子水使終體積為                   25ul


PKC陽性對照檢測

PepTag⑧PKC Reaction 5X Buffer          5ul

PepTag@ C1 Peptide (0 4ug/ul)           5ul

PKC Activator 5XSolution,超聲處理的      5ul

短肽保護液(非必須)                   1ul

Protein Kinase C (2.5ug/ml溶于PKC dilution bufer)     4ul

去離子水使終體積為                  25ul


PKC陰性對照檢測(不加PKC)

PepTag@ PKC Reaction 5X Buffer         5ul

PepTag@ C1 Peptide (0 4ug/ul)          5ul

PKC Activator 5XSolution,超聲處理的     5ul

短肽保護液(非必須)                  1ul

去離子水使終體積為               25ul


7.在0時間點,把--支管子從冰上移到30°C水浴中孵育2分鐘。然后加入樣品或蛋白激酶C在30°C再孵育30分鐘。

8.把管子放進開水浴或95°C加熱塊10分鐘以終止反應。在凝膠電泳前把樣品--直避光存放在4°C或-20°C。

9.把樣品上樣到膠上之前,往每個樣品中加進1ul的80%甘油,以確保樣品保留在上樣孔中(說明書第II.F部分)。

10.每孔點樣10ul,在0. 8%瓊脂糖凝膠上以100V電泳15分鐘分開樣品,拍照。


檢測結果:

說明:后面2組泳道“陽性(PC)"和“陰性(NC)"為試劑盒自帶系統對照。

注:陽性條帶以Gel pro4版凝膠光密度分析軟件進行分析,測其IOD (integrated optical density)累積光密度參考值。按照百分比例計算PKC活性百分比

(以陽性對照I0D值為100,其余各組的PKC+ p-PKC總和為100分配IOD數值)


2011年開始我們致力于在生命科學領域生物醫學實驗外包及論文潤色服務,協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯系。

 

實驗代做服務:

 

試劑盒免費代檢測

石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光

掃描電鏡服務

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實驗服務

細胞熒光染料標記檢測實驗

 

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

HE染色

六胺銀法染色實驗服務

天狼猩紅染色實驗服務

 

網狀纖維染色銀染實驗服務

染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

免疫組化IHC染色實驗服務

油紅O染色實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

免疫共沉淀(Co-IP)實驗代做

免疫細胞化學ICC實驗服務

PKC活性檢測實驗

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

 

蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

探針合成實驗服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

喹諾酮類快速檢測試劑盒

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒


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